A enzima DNA helicase descompacta a dupla hélice do DNA para permitir sua replicação. DNA helicase tem uma velocidade de rotação de 10.000 rotações por minuto e se move à frente do garfo de replicação. Ele desenrola continuamente as fitas de DNA para permitir que a DNA polimerase se conecte a novas fitas de nucleotídeos.
A DNA helicase é uma estrutura em anel hexamérico de seis subunidades. Ele descompacta a dupla hélice quebrando as ligações de hidrogênio que mantêm as fitas de DNA juntas. Depois de ser descompactado, a fita com o grupo 3 '-OH torna-se a fita principal, que pode ser replicada imediatamente. A fita com o grupo 5 '-OH é a fita retardada e é replicada posteriormente em um processo conhecido como replicação descontínua.