Na peça shakesperiana "Macbeth", Macduff opta por fugir para a Inglaterra em resposta ao assassinato de Duncan por Macbeth para apoiar Malcolm, filho e herdeiro de Duncan. Ao fugir para a Inglaterra, no entanto, Macduff condena sua própria família, que é assassinada por Macbeth em resposta. Ao fugir para a Inglaterra, Macduff também tenta persuadir Malcolm a recuperar o trono escocês com uma demonstração de força.
Na peça, o primeiro diálogo de Macduff envolve a descoberta do cadáver do Rei Duncan dentro do castelo de Macbeth. Sua decisão de fugir para a Inglaterra deve-se à suspeita de que Macbeth era, de fato, o assassino de Duncan. Enquanto na Inglaterra e tentando persuadir Malcolm a agir, Macduff é informado da morte de sua família e das consequências de sua ação por outro guerreiro escocês chamado Ross.
Macduff eventualmente retorna à Escócia ao lado de Malcolm e seus aliados ingleses e encontra Macbeth na batalha no Castelo Dunsinane. Macduff eventualmente mata Macbeth, embora na peça isso ocorra fora do palco. Ele então apresenta sua cabeça a Malcolm e o declara o legítimo rei da Escócia.
Antes do assassinato do Rei Duncan por Macbeth, Macduff detinha o título de Thane de Fife. As primeiras referências a Macduff são encontradas em uma obra do século 14 chamada "Chronica Gentis Scotorum".
