Nas células eucarióticas, a glicólise ocorre no citosol. Após a glicólise, os produtos podem ser posteriormente decompostos na mitocôndria.
A glicólise descreve uma série de reações químicas pelas quais uma célula passa para produzir energia rapidamente. Uma série de reações em uma célula é chamada de via metabólica. A glicólise começa com as moléculas de glicose armazenadas na forma de glicogênio sendo liberadas e transformadas em um composto chamado glicose 6-fosfato. Duas moléculas de trifosfato de adenosina, que é a fonte de energia de uma célula, são necessárias para esta primeira etapa. No total, a glicólise produz um total de 4 ATP por molécula de glicose, o que significa que há um ganho líquido de 2 ATP por molécula de glicose dessa via.