Ao preparar bactérias para observação com um microscópio, a fixação por calor do esfregaço na lâmina mata as bactérias para impedir a propagação potencial de doenças e adere o esfregaço à lâmina. Após a fixação por calor, o esfregaço está manchado.
De acordo com o departamento de microbiologia da Universidade de Wisconsin-Madison, a preparação do esfregaço começa com uma amostra de bactéria misturada com um pouco de água destilada. A amostra é espalhada finamente na lâmina e deixada secar ao ar. Em seguida, a lâmina é fixada por calor passando a parte inferior através da chama de um bico de Bunsen algumas vezes. Após a fixação adequada com calor, a lâmina fica quente, mas não muito quente. Quando a lâmina esfriar, a mancha é aplicada.
