A solução de iodo funciona como um mordente que torna a mancha mais proeminente e o corante violeta de cristal torna-se mais fortemente ligado à célula bacteriana. Adicionar solução de iodo ou cloreto de potássio é a segunda etapa no processo de coloração de Gram.
A coloração de Gram é a técnica comum e mais amplamente usada para diferenciar entre bactérias gram negativas e gram positivas. Este processo é baseado no princípio de que as bactérias reagem de forma diferente ao seu ambiente, portanto, também reagem (ou tingem) de forma diferente, ajudando na sua identificação.
O processo de coloração do grão envolve as seguintes etapas:
Etapa 1
A bactéria é tratada com o corante violeta de cristal e depois com a solução de iodo.
Etapa 2
Após a coloração, agentes descolorantes são adicionados à amostra. Isso desidrata, encolhe e aperta a camada de peptidoglicano da bactéria. Os agentes de coloração ficam presos dentro das células de bactérias gram-positivas por causa de sua camada mais espessa de peptidoglicano, enquanto as bactérias gram-negativas são incapazes de segurar a mancha devido à sua camada fina.
Etapa 3
Uma contracoloração é adicionada à amostra, colorindo-a de vermelho. A coloração vermelha não altera a coloração roxa das células gram positivas. Por outro lado, adiciona uma cor vermelha às bactérias gram-negativas.
