A etapa de descoloração é a mais crítica na coloração de Gram. O resultado nesta etapa é baseado na facilidade com que a célula libera o complexo cristal violeta-iodo.
Descoberto pelo Dr. Hans Christian Gram em 1884, a coloração de Gram é uma coloração diferencial usada na identificação de bactérias. Dividir as células bacterianas em dois grupos principais (Gram positivas e Gram negativas), é uma ferramenta crítica na classificação e diferenciação de bactérias. As duas manchas necessárias são a primária e a contracoloração. A descoloração excessiva faz com que a mancha primária desapareça e os Gram positivos pareçam Gram negativos. Por outro lado, a descoloração insuficiente não remove o complexo cristalino de iodo violento, que faz com que as bactérias Gram negativas pareçam positivas.
