Quais são as etapas da eletroforese em gel?

A eletroforese em gel é um processo de separação de biomoléculas de diferentes tamanhos, passando-as por uma matriz semelhante a uma peneira usando eletricidade. As moléculas maiores se movem mais lentamente, enquanto as moléculas menores deslizam pela matriz e se movem mais rápido e mais longe, separando assim os diferentes fragmentos com base no tamanho.

O primeiro passo para a eletroforese em gel é definir a matriz do gel. A agarose é usada para separar moléculas de DNA e a acrilamida é usada para separar proteínas. O gel começa como um líquido, que é despejado em uma bandeja de moldagem. Um pente é colocado na matriz líquida para que, quando a matriz se solidifique, sejam formados poços para carregar as amostras neles. Uma vez que o gel solidificou, ele é removido do molde e colocado em um aparelho especial onde a corrente pode ser aplicada. Um buffer que pode atuar como condutor de eletricidade é colocado em torno da matriz.

As amostras de biomoléculas são geralmente misturadas com uma substância de alta densidade (um corante viscoso) para que afundem no fundo do poço em vez de flutuar no tampão. O corante também ajuda a acompanhar o andamento do experimento. Cada amostra é carregada em um poço separado. Normalmente, um dos poços é designado para o carregamento de um marcador, que contém um conjunto de fragmentos cujos tamanhos já são conhecidos para permitir a comparação com as amostras que estão sendo carregadas.

Quando a corrente é ligada, as amostras tendem a se mover para o lado carregado positivamente do aparelho, uma vez que os esqueletos de fosfato das moléculas conferem uma carga negativa a eles. Depois que as amostras percorrem uma distância suficiente, a matriz é estudada para visualizar as bandas que são formadas pela separação das moléculas.