Os iroqueses acreditavam em várias divindades, sendo a mais importante o criador dos seres humanos, plantas, animais e do bem no mundo, conhecido como Grande Espírito. Embora eles não acreditassem que os humanos pudessem se comunicar diretamente com esses espíritos, eles acreditavam que isso era possível através da queima de tabaco.
Os iroqueses tinham grande reverência por seus sonhos e interpretavam e procuravam sinais neles. Eles não tinham padres ou xamãs em tempo integral, mas designavam especialistas em tempo parcial, homens e mulheres, para conduzir cerimônias religiosas.
Os iroqueses criaram "máscaras faciais falsas", que eram rostos esculpidos em árvores em pé e depois recortados, decorados e usados. Essas máscaras representavam os espíritos que apareceram para o entalhador na cerimônia de fumo realizada anteriormente.
Os homens da tribo caçavam e pescavam, construíam casas, limpavam campos para o plantio, negociavam com estranhos e participavam de qualquer guerra. As mulheres cultivavam, criavam filhos, preparavam refeições e faziam cestas e outros utensílios.
Muitas partes da cultura iroquesa envolviam aspectos matrilineares. Embora as pessoas se casassem e se divorciassem e os homens freqüentemente tivessem várias esposas, após o divórcio os filhos permaneceram com a mãe. A herança também seguia esse padrão, com a propriedade indo para as mulheres.
Os iroqueses não praticavam nenhum rito de passagem formalizado conhecido, exceto para aqueles que assumiam uma posição política.
