Os testículos, localizados no escroto, produzem e secretam testosterona. Embora desempenhem um papel menor na saúde reprodutiva, os ovários das mulheres também criam e secretam pequenas quantidades de testosterona. Em ambos os sexos, é o hipotálamo e a glândula pituitária que determinam a quantidade de testosterona produzida.
Pequenas quantidades desse hormônio também são secretadas pelas glândulas supra-renais. A testosterona é o andrógeno primário nos homens, e o aumento dos níveis desse hormônio durante a puberdade resulta no desenvolvimento de pelos faciais, aumento da altura e massa muscular, voz mais profunda e um pomo de Adão. A testosterona também é essencial para o desenvolvimento saudável do sistema reprodutor masculino.