Os tubarões-tigre existem no topo da cadeia alimentar e se alimentam de uma grande variedade de espécies, incluindo peixes, tartarugas marinhas e outros tubarões. Além disso, os tubarões-tigre se alimentam de pássaros marinhos, capturando-os quando pousam na superfície da água. Moluscos como caracóis do mar, conchas e búzios também servem como presas para os tubarões oportunistas. Os tubarões-tigre também são necrófagos que costumam comer lixo.
De acordo com o Shark Bay Ecosystem Research Project, os tubarões-tigre são importantes na regulação da população de muitas das pequenas espécies que partilham o seu habitat. Isso inclui as espécies que os tubarões-tigre caçam, bem como aquelas que raramente comem. Isso ocorre porque as espécies não-presas ainda devem evitar os tubarões-tigre que rondam; por causa disso, eles não podem procurar comida com tanta frequência. Isso torna mais difícil para essas espécies crescerem, se desenvolverem e se reproduzirem.
Embora os tubarões-tigre raramente ataquem os humanos, eles ficam atrás apenas dos grandes tubarões brancos em termos de ataques humanos relatados. No Havaí, onde os tubarões-tigre são comuns, há uma média de um ataque humano a cada ano, de acordo com o Projeto de Pesquisa de Ecossistema da Baía de Tubarão.
Embora os tubarões-tigre sejam predadores de ponta, eles costumam ser capturados e comidos por humanos.
A presa específica dos tubarões-tigre geralmente varia de um local para outro. Em algumas áreas, as cobras marinhas são espécies de presas comuns, enquanto os dugongos são presas importantes em outras áreas. Os tubarões-tigre têm sido chamados de? Latas de lixo? do mar, com base em sua propensão para comer itens estranhos. Botas de borracha, calotas, sacos de carvão, capas de chuva, bolsas e outras coisas estranhas são freqüentemente encontradas nos tubarões? estômagos. Um tubarão-tigre ainda continha uma armadura em seu estômago.
Os tubarões-tigre estão no topo da cadeia alimentar em suas áreas de estudo locais. Como seu impacto no ecossistema é desproporcionalmente grande em relação à sua prevalência, os cientistas se referem aos tubarões-tigre como uma espécie-chave. Isso significa que os tubarões-tigre ajudam a regular todo o habitat, mantendo as populações de espécies de presas sob controle. Sem os tubarões para consumir muitos desses peixes pequenos, os peixes consumiriam muitos recursos do habitat, o que poderia causar o colapso do ecossistema local.