Um diafragma em um microscópio é a peça que permite ao usuário ajustar a quantidade de luz que é focada sob a amostra sendo observada. Um diafragma é normalmente encontrado em microscópios de maior potência versus menos caros ou modelos de brinquedo.
O diafragma está localizado diretamente sob o palco ou plataforma onde o usuário coloca a amostra ou lâmina. O disco do diafragma, às vezes chamado de íris, tem pequenos orifícios que permitem a entrada de vários graus de luz sob a amostra. Ao abrir o diafragma, um item que a princípio parece muito escuro é mais fácil de observar. Ajustar o diafragma também pode criar contraste para melhor visualização de amostras transparentes.