O habitat natural dos morcegos vampiros é um ambiente quente, tropical ou subtropical. Eles podem ser encontrados em elevações de até 2.400 metros e normalmente vivem em áreas moderadamente iluminadas.
Os morcegos vampiros vivem em colônias de aproximadamente 100 morcegos, embora possa haver até 1.000 ou mais em uma única colônia. Essas colônias vivem em cavernas, ocos de árvores, edifícios abandonados, antigos poços de minas e outros lugares escuros. Eles dormem durante o dia, pendurados de cabeça para baixo no topo de sua residência, e saem para caçar à noite. Os morcegos vampiros são os únicos mamíferos que subsistem do sangue quente de suas presas, normalmente gado, cavalos ou outros animais de fazenda, e atacam do solo.